产品及特点
本检测试剂盒是基于探针法荧光定量PCR原理开发而成,具有以下几大特点:

1. 即开即用:用户仅需提供样品DNA模板,无需复杂操作。
2. 高灵敏度:经过优化的引物等组分,使得检测灵敏度显著提升。
3. 附带阳性对照:方便用户快速区分假阴性样品,提高检测的可靠性。
4. 高特异性:引物依据中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区设计,避免与其他生物样本DNA的交叉反应。
5. 定性与定量兼具:既可用于定性检测,也可用于定量检测,定量检测的线性范围达到至少5个数量级。
6. 大容量设计:本产品可完成50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 科研专用:本产品仅限于科研用途。
方法步骤
一、DNA提取(样本制备区)
使用自选方法提取纯化样品DNA,确保与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
二、稀释标准曲线样品(样本制备区)
由于阳性对照浓度较高,稀释操作需在独立区域进行,以避免污染样品或本试剂盒成分。操作步骤如下:1. 标记6个离心管,依次为7、6、5、4、3、2。
2. 向每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照,震荡1分钟,获得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品,置于冰上待用。
4. 使用新枪头,在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照,震荡1分钟,获得1×10E6拷贝/μL的样品,置于冰上待用。
5. 按照上述方式依次稀释至5号管,最后得出6个不同稀释度的标准曲线样品。如不需制作标准曲线,则将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。
三、试剂配制(试剂准备区)
根据待检样品数目,准备N+2个qPCR管(包括N个待检样品、1个阴性对照、6个阳性对照),并按说明书加入相应成分,转移至样本准备区。
四、添加模板(模板添加区)
向每个qPCR管中加入2μL模板,添加顺序为阴性对照(DEPC-H2O)、待测样品模板及婴儿利什曼虫qPCR阳性对照。离心30秒后,立即进行扩增反应。
五、扩增反应(扩增及产物分析区)
将PCR管放置在PCR扩增仪器样品槽的相应位置,进行扩增。扩增程序请参见详细说明书。
六、结果分析
1. 若制作标准曲线,以阳性对照浓度的log值为横轴,Ct值为纵轴,绘制标准曲线,根据待测样品的Ct值推算样品DNA浓度。
2. 如果未制作标准曲线,依据如下标准进行结果判定:
阳性对照结果:Ct值<30,显示明显指数增长,呈现典型的S型曲线。
阴性对照结果:Ct值38或无Ct值,无明显指数增长期和平台期。
样本检测结果:Ct值<35,有明显指数增长,表明样本中检测出婴儿利什曼虫,结果为阳性;Ct值38或无Ct值,说明样本中未检测出婴儿利什曼虫,结果为阴性;若Ct值在35-38范围,需对样本进行复检,如复检仍在此范围且有明显指数增长,则判定为阳性;否则为阴性。
运输及保存
本产品应在低温下运输,储存条件为-20℃,保存期限为一年。阳性对照需独立存放,以免污染其他试剂。选择
尊龙凯时的产品,确保您的实验结果可靠,助力科研进展!